Bilangan Peroksida

Lipida adalah golongan senyawa organik yang sangat heterogen yang menyusun

jaringan tumbuhan dan hewan. Lipida merupakan golongan senyawa organik kedua yang

menjadi sumber makanan, merupakan kira-kira 40% dari makanan yang dimakan setiap

hari. Lipida mempunyai sifat umum sebagai berikut:

a.    Tidak larut dalam air

b.    larut dalam pelarut organik seperti benzena, eter, aseton, kloroform, dan

c.     karbontetraklorida

d.    mengandung unsur-unsur karbon, hidrogen, dan oksigen, kadang-kadang

juga mengandung nitrogen dan fosfor

e.     bila dihidrolisis akan menghasilkan asam lemak

f.     berperan pada metabolisme tumbuhan dan hewan.

Berbeda dengan karbohidrat dan protein, lipida bukan suatu polimer, tidak

mempunyai satuan yang berulang. Pembagian yang didasarkan atas hasil hidrolisisnya,

lipida digolongkan menjadi lipida sederhana, lipida majemuk, dan sterol.

A. Lipida Sederhana

Minyak dan lemak termasuk dalam golongan lipida sederhana. Minyak dan lemak

yang telah dipisahkan dari jaringan asalnya mengandung sejumlah kecil komponen selain

trigliserida, yaitu: lipida kompleks (lesitin, sephalin, fosfatida lainnya, glikolipida), sterol

yang berada dalam keadaan bebas atau terikat dengan asam lemak, asam lemak bebas, lilin,

pigmen yang larut dalam lemak, dan hidrokarbon. Komponen tersebut mempengaruhi

warna dan flavor produk.

Lemak dan minyak terdiri dari trigliserida campuran, yang merupakan ester dari

gliserol dan asam lemak rantai panjang. Minyak nabati terdapat dalam buah-buahan,

kacang-kacangan, biji-bijian, akar tanaman, dan sayur-sayuran. Dalam jaringan hewan

lemak terdapat di seluruh badan, tetapi jumlah terbanyak terdapat dalam jaringan adipose

dan sumsum tulang.

Secara kimia yang diartikan dengan lemak adalah trigliserida dari gliserol dan asam

lemak. Berdasarkan bentuk strukturnya trigliserida dapat dipandang sebagai hasil

kondensasi ester dari satu molekul gliseril dengan tiga molekul asam lemak, sehingga

senyawa ini sering juga disebut sebagai triasilgliserol. Jika ketiga asam lemak penyusun

lemak itu sama disebut trigliserida paling sederhana. Tetapi jika ketiga asam lemak tersebut

tidak sama disebut dengan trigliserida campuran. Pada umumnya trigliserida alam

mengandung lebih dari satu jenis asam lemak. Trigliserida jika dihidrolisis akan

menghasilkan 3 molekul asam lemak rantai panjang dan 1 molekul gliserol. Reaksi

hidrolisis trigliserida dapat digambarkan sebagai berikut:

Lemak yang sebagian besar tersusun dari gliserida asam lemak jenuh akan

berwujud padat pada suhu kamar. Kebanyakan lemak binatang tersusun atas asam lemak

jenuh sehingga berupa zat padat. Lemak yang sebagian besar tersusun dari gliserida asam

lemak tidak jenuh berupa zat cair pada suhu kamar, contohnya adalah minyak tumbuhan.

Lemak jika dikenakan pada jari akan terasa licin, dan pada kertas akan membentuk titik

transparan.

B. Lipida Majemuk

Lipida majemuk jika dihidrolisis akan menghasilkan gliserol , asam lemak dan zat

lain. Secara umum lipida komplekss dikelompokkan menjadi dua, yaitu fosfolipida dan

glikolipida. Fosfolipida adalah suatu lipida yang jika dihidrolisis akan menghasilkan asam

lemak, gliserol, asam fosfat serta senyawa nitrogen. Contoh senyawa yang termasuk dalam

golongan ini adalah lesitin dan sephalin.

Glikolipida adalah suatu lipida kompleks yang mengandung karbohidrat. Salah satu

contoh senyawa yang termasuk dalam golongan ini adalah serebrosida. Serebrosida

terutama terbentuk dalam jaringan otak, senyawa ini merupakan penyusun kurang lebih 7

% berat kering otak, dan pada jaringan syaraf.

C. Sterol

Sterol sering ditemukan bersama-sama dengan lemak. Sterol dapat dipisahkan dari

lemak setelah penyabunan. Oleh karena sterol tidak tersabunkan maka senyawa ini terdapat

dalam residu. Lebih dari 30 jenis sterol telah dijumpai di alam, terdapat pada jaringan

binatang dan tumbuhan, ragi, jamur, tetapi jarang ditemukan dalam bakteri.

Persenyawaan sterol yang terdapat dalam minyak terdiri dari kolesterol dan

fitostrerol. Senyawa kolesterol umumnya terdapat dalam lemak hewani, sedangkan

fitosterol terdapat dalam minyak nabati.

Kolesterol merupakan penyusun utama batu empedu. Kolesterol berfungsi membantu

absorbsi asam lemak dari usus kecil, juga merupakan prazat (precursor) bagi pembentukan

asam empedu, hormon steroid, dan vitamin D (Harper, 1979).

Akhir-akhir ini kolesterol banyak menarik perhatian karena diduga ada hubungan

antara kadar kolesterol dalam darah dengan penyakit jantung koroner, dan pengerasan

pembuluh darah (atherosclerosis). Kolesterol di dalam darah beredar tidak dalam keadaan

bebas, akan tetapi berada dalam partikel-partikel lipoprotein. Lipoprotein merupakan

senyawa kompleks antara lemak dan protein. Dalam serum darah lipoprotein terdiri atas 4

jenis, yaitu kilomikron, very low density lipoprotein (VLDL), low density lipoprotein

(LDL), dan high density lipoprotein (HDL) (Devlin, 1992:67). Kilomikron mengandung 96

% trigliserida; 1,7 % protein; 1,75 % kolesterol; dan 0,6 % fosfolipida. Kilomikron

berfungsi sebagai pengangkut lemak dari usus ke tempat-tempat yang membutuhkan.

VLDL mengandung 60 trigliserida; 15 % kolesterol; 10 % protein; dan 15 % fosfolipida.

VLDL berfungsi sebagai pengangkut trigliserida endogen dari tempat-tempat

pembentukannya ke tempat yang membutuhkan. LDL mengandung 10 % trigliserida; 45 %

kolesterol; 25 % protein; dan 20 % fosfolipida. LDL berfungsi mengangkut kolesterol dari

sel yang satu ke sel lainnya dimana kolesterol tersebut diperlukan untuk pembentukan

hormon sterol dan steroid. HDL mengandung 3 % trigliserida; 18 % kolesterol; 50 %

protein, dan 30 % fosfolipida. HDL berfungsi mengangkut kolesterol ke hati untuk

didegradasi menjadi asam empedu dan dibuang dalam kantong empedu.

Dari data tersebut dapat dilihat bahwa LDL mengandung kolesterol yang cukup

tinggi, hal ini berarti bahwa dengan peningkatan kadar LDL di dalam darah selalu disertai

hiperkolesterolemia. Apabila kadar HDL di dalam serum darah rendah maka kolesterol

yang dimetabolisme relatif sedikit, sehingga banyak kolesterol yang tertimbun. Akibat

penimbunan ini terjadi hiperkolesterolemia, dan lebih lanjut akan menjadi atherosclerosis,

yaitu terjadi pengendapan kolesterol dan lipida lainnya pada dinding arteri, dan lebih lanjut

akan terjadi pengerasan dinding arteri tersebut (Mathews dan van Holde, 1991:627). Dari

hasil penelitian diperoleh suatu kenyataan bahwa HDL mempunyai sifat spesifik, karena

hubungannya yang bersifat negatif terhadap atherosclerosis dan hiperkolesterolemia.

Semakin tinggi kadar kolesterol-HDL dalam serum darah maka akan semakin kecil

kemungkinan individu tersebut mengalami penyakit atherosclerosis (Sunaryo, dkk, 1985).

Lebih lanjut Linder (1985) mengatakan bahwa orang yang mempunyai kadar kolesterol

sekitar 260 mg/100 ml darah mempunyai kemungkinan dua kali lebih besar untuk terkena

penyakit jantung koroner dari pada orang yang kadar kolesterolnya di bawah 220 mg/100

ml.

II. ANALISIS LIPIDA

A. Penentuan Kadar Minyak/Lemak

Penentuan kadar minyak atau lemak suatu bahan dapat dilakukan dengan alat

ekstraktor Soxhlet. Ekstraksi dengan alat Soxhlet merupakan cara ekstraksi yang efisien,

karena pelarut yang digunakan dapat diperoleh kembali. Dalam penentuan kadar minyak

atau lemak, bahan yang diuji harus cukup kering, karena jika masih basah selain

memperlambat proses ekstraksi, air dapat turun ke dalam labu dan akan mempengaruhi

dalam perhitungan (Ketaren, 1986:36). Sebagai contoh adalah ekstraksi minyak dalam

kemiri, dengan prosedur sebagai berikut:

Timbang 15 gram kemiri, diiris-iris sampai lembut. Selanjutnya dibungkus dengan

kertas saring bebas lemak, ujung atas maupun ujung bawah ditutup dengan kapas bebas

lemak. Kemudian masukkan ke dalam alat Soxhlet, masukkan pelarut petroleum eter

sebanyak 60% dari volume labu ekstraksi dan lakukan ekstraksi selama 1,5 jam. Proses

ekstraksi selesai apabila petroleum eter sudah jernih. Ekstrak yang diperoleh ditambah

dengan natrium sulfat anhidrat, saring. Kemudian filtrat didistilasi biasa, atau petroleum

eter diuapkan dengan evaporator berputar sampai semua petroleum eter habis. Kadar

minyak dapat dihitung dengan rumus:

(B - A) 100

Kadar minyak (%) =

berat bahan (gr)

Keterangan:

A= berat labu kosong

B= berat labu dan ekstrak minyak (gr)

B. Penentuan Angka Peroksida Minyak/Lemak

Angka peroksida sangat penting untuk identifikasi tingkat oksidasi minyak. Minyak

yang mengandung asam- asam lemak tidak jenuh dapat teroksidasi oleh oksigen yang

menghasilkan suatu senyawa peroksida. Cara yang sering digunakan untuk menentukan

angka peroksida adalah dengan metoda titrasi iodometri. Dalam metoda ini minyak

dilarutkan ke dalam larutan asam asetat glacial-kloroform (3:2) yang kemudian

ditambahkan KI. Dalam campuran tersebut akan terjadi reaksi KI dalam suasana asam

dengan peroksida yang akan membebaskan I2. Kemudian I2 yang dibebaskan selanjutnya

dititrasi dengan larutan standar natrium tiosulfat (Anwar, 1996:396).

Penentuan besarnya angka peroksida dilakukan dengan titrasi iodometri, melalui

tahap-tahap sebagai berikut (Slamet Sudarmaji, 1989:123):

1. Pembuatan larutan standar natrium tiosulfat 0,01N

Ditimbang 2,5 gram Na2S2O3.5H2O dilarutkan dengan akuades, dipindahkan ke

dalam labu ukur 1 liter, diencerkan dengan akuades sampai tanda. Larutan ini disimpan

tertutup untuk dipakai, sebelumnya distandarisasi dengan larutan K2Cr2O7.

2. Standarisasi larutan Na2S2O3 dengan K2S2O7.

Ditimbang 0,5 gram kristal K2Cr2O7 dan dimasukkan ke dalam labu ukur 1 liter

kemudian diencerkan dengan akuades sampai tanda. Dari larutan K2Cr2O7 tersebut

diambil 10 ml dengan pipet volum, dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer serta

ditambahkan 3 ml HCl pekat dan 10 ml larutan KI 0,1 N. Iodium yang dibebaskan dititrasi

dengan larutan Na2S2O3 0,01N yang telah dibuat, menggunakan indikator amilum. Pada

titik ekivalen warna berubah dari biru tua menjadi hijau. Standarisasi dilakukan dengan

pengulangan 3 kali. Normalitas Na2S2O3 sesungguhnya dihitung dengan rumus:

a 6 10

Ns = x x

v 294 1000

Keterangan:

Ns = normalitas larutan Na2S2O3 sesudah distandarisasi

A = massa K2Cr2O7 dalam miligram

V = volum larutan Na2S2O3 yang dibutuhkan untuk titrasi.

3. Pembuatan indikator amilum 1 %

Ditimbang 1 gram amilum, dilarutkan dalam 100 ml akuades dalam gelas piala.

Kemudian dipanaskan di atas kompor listrik sampai mendidih dan dibiarkan mendidih

sampai 3 menit. Larutan ini digunakan setelah dingin.

4. Pembuatan pelarut asam asetat glasial : kloroform dengan perbandingan 3 : 2

Untuk membuat pelarut asam asetat glasial : kloroform dengan perbandingan 3 : 2

sebanyak 1 liter, dicampurkan 600 ml asam asetat glasial dengan 400 ml kloroform dalam

botol berwarna gelap.

5. Penentuan angka peroksida

Ditimbang minyak sebanyak (5,00 + 0,05) gram dan dimasukkan ke dalam

erlenmeyer serta ditambahkan 30 ml pelarut asam asetat glasial : kloroform (3 :2),

dikocok sampai minyak larut. Setelah minyak larut ditambahkan 0,5 ml larutan KI jenuh

dan ditutup rapat sambil dikocok. Kemudian didiamkan 1-2 menit, selanjutnya

ditambahkan 30 ml akuades. Campuran tersebut kemudian dititrasi dengan larutan

Na2S2O3 yang telah distandarisasi sampai warna kuning hampir hilang. Kemudian

ditambah 0,5 ml indikator amilum 1 %. Titrasi dilanjutkan sampai titik ekivalen yaitu tepat

saat warna biru hilang. Volum titran dicatat. Dengan cara yang sama dibuat juga titrasi

larutan blangko.

Rumus perhitungan angka peroksida dalam minyak adalah sebagai berikut:

(a-b) x N x 1000

Angka peroksida =

G

Keterangan :

Angka peroksida dinyatakan dalam milligram ekivalen per 1000 gram minyak.

a = jumlah ml larutan natrium tiosulfat untuk titrasi sampel

b = jumlah ml larutan natrium tiosulfat untuk titrasi blangko

N = normalitas larutan natrium tiosulfat setelah distandarisasi

G = masa minyak dalam gram.

C. Penentuan Bilangan Penyabunan Minyak/Lemak

Penentuan bilangan penyabunan meliputi langkah-langkah sebagai berikut:

1. Pembuatan KOH alkoholis 0,5 N

Ditimbang 6 gram tablet KOH murni, dilarutkan dengan etanol 95% sampai volume

250 ml. Larutan itu dibiarkan semalam dalam botol tertutup. Kemudian disaring

dan distandarisasi dengan HCl 0,5 N menggunakan indikator pp.

2. Standarisasi KOH alkoholis 0,5 N

Diambil 10 ml KOH alkoholis 0,5 N yang telah dibuat menggunakan pipet ukur,

masukkan dalam erlenmeyer. Titrasi menggunakan HCl 0,5 N menggunakan

indikator pp. Titrasi dilakukan tiga kali (triplo).

3. Penentuan angka penyabunan

Timbang 0,5 – 1,0 gram minyak/lemak, masukkan dalam labu alas bulat volume

100 ml Tambahkan 50 ml larutan KOH alkoholis 0,5 N yang sudah distandarisasi.

Kemudian direfluk dengan pemanas sampai larutan menjadi jernih ( + 1,5 – 2 jam).

Setelah refluk selesai dinginkan dan encerkan sampai 250 ml. Diambil 25 ml

larutan hasil pengenceran, titrasi menggunakan HCl 0,1 N menggunakan indikator

pp. Titrasi dilakukan tiga kali.

4. Perhitungan angka penyabunan

Misal:

Berat minyak/lemak yang ditentukan angka penyabunannya = W gram

( Word to PDF Converter - Unregistered )

http://www.Word-to-PDF-Converter.net

8

Untuk menitrasi 25 ml larutan hasil penyabunan memerlukan=V ml HCL 0,1N

Maka:

Untuk menitrasi 250 ml larutan hasil penyabunan memerlukan:

= 250/25 x V ml HCl 0,1 N

= 10 x V x 0,1 ml HCl 0,5 N

0,5

= 2 V ml HCl 0,5 N

Volume KOH 0,5 N yang diperlukan untuk penyabunan = (50 – 2 V ) ml

Dalam setiap 1000 ml KOH 1 N terdapat = 56 gram KOH, maka dalam 1000 ml

KOH 0,5 N terdapat = 28 gram KOH

Maka dalam (50 – 2 V) ml KOH 0,5 N terdapat = (50 – 2V) x 28/1000 gram KOH

W gram minyak/lemak membutuhkan (50 – 2 V) x 28/1000 gram KOH

Sehingga 1 gram minyak/lemak membutuhkan =

(50 – 2 V) 28

x gram KOH atau

1000 W

(50 – 2 V) 28

x 1000 mgram KOH

1000 W

D. Analisis Lipida Komplekss

1. Ekstraksi dan Pemisahan Kolesterol

Tambahkan 4 volume aseton (200 ml) pada 50 gram sample otak kambing, blender selama

1 menit. Pindahkan suspensi yang terjadi ke dalam beaker gelas dan bilas blender dengan

25 ml aseton. Campur hasil bilasan dengan suspensi dalam beaker dan diamkan homogenat

ini selama 5 menit sambil kadang-kadang diaduk dengan pengaduk.

Saring suspensi menggunakan penyaring Buchner. Residu yang tertinggal diblender lagi

dengan 100 ml aseton, kemudian setelah didiamkan selama 5 menit, saring dengan

penyaring Buchner seperti pengerjaan sebelumnya.

Bilas blender dengan 50 ml aseton, tuangkan ke dalam penyaring Buchner yang masih

mengandung residu. Filtrat dicampur dengan filtrat pertama, filtrat ini mengandung

kolesterol.

Hilangkan aseton dari filtrat dengan jalan destilasi di atas penangas air, atau menggunakan

evaporator berputar. Dinginkan larutan sisa (residu) dengan air leideng, dan kumpulkan

crude kolesterol yang terjadi dengan jalan menyaring menggunakan corong Buchner.

Rekristalisasi kolesterol yang terjadi dengan melarutkan dalam sedikit mungkin etanol

panas, lalu dengan segera filtrat disaring (masih dalam keadaan panas) ke dalam

Erlenmeyer kecil yang ditempatkan di dalam penangas air didih. Biarkan filtrat di dalam

Erlenmeyer mendidih sehingga etanol akan berkondensasi.

Keringkan kolesterol yang terjadi di udara, timbang dan catat beratnya. Tentukan titik

lelehnya (titik leleh kolesterol murni 149-1510C). Untuk identifikasi adanya senyawa

kolesterol dapat digunakan uji Salkowski dan uji Libermann-Buchard.

Uji Salkowski:

Sediakan 3 tabung reaksi sebagai berikut:

1.    Tabung no. 1 diisi dengan 1 ml kloroform

2.     Tabung no. 2 diisi dengan 10 mg kolesterol hasil isolasi dalam 1 ml kloroform

3.     Tabung no. 3 diisi dengan 10 mg kolesterol murni dalam 1 ml kloroform

Tambahkan 1 ml H2SO4 pekat pada ketiga tabung tersebut melalui dinding tabung hingga

lapisan asam sulfat ada di bagian bawah tabung. Perhatikan warna yang terbentuk!

Uji Libermann-Buchard:

Sediakan 3 tabung reaksi sebagai berikut:

1.     Tabung no.1 diisi dengan 2 ml kloroform

2.     Tabung no. 2 diisi dengan 5 – 15 mg kolesterol hasil isolasi dalam 2 ml kloroform

3.     Tabung no. 3 diisi dengan 5 – 15 mg kolesterol murni dalam 2 ml kloroform

Perhatikan: hindarkan adanya air/kelembaban

Tambahkan 1 ml asam asetat anhidrida ke dalam tabung-tabung tersebut, aduk dengan

baik. Kemudian tambahkan 2 ml asam sulfat pekat, aduk dengan hati-hati. Catat warna

yang timbul setelah didiamkan 30 menit.

Peringatan:

Pelarut-pelarut yang dipakai kebanyakan mudah terbakar, untuk itu harus hati-hati, jangan

ada api bebas! Untuk semua pemanasan pakailah penangas air didih! Juga dalam

penggunaan blender dengan pelarut-pelarut yang mudah terbakar harus hati-hati, sebab

pelarut dapat merembes ke tempat motor dan menyebabkan nyala!

2. Penentuan Kolesterol Total Serum Darah

Prinsip Dasar:

Anhidrid asetat bereaksi dengan kolesterol dalam larutan kloroform menghasilkan

suatu larutan berwarna hijau kebiruan yang karakteristik. Sampai saat ini belum diketahui

secara pasti gugus kromofor yang menimbulkan warna tersebut, namun diduga melibatkan

reaksi esterifikasi gugus hidroksi pada posisi ketiga seperti terlihat pada susunan

molekulnya.

Darah atau serum darah diekstraksi dengan campuran alkohol-aseton yang

bertujuan memindahkan kolesterol dan lipida-lipida lain serta mengendapkan protein.

Kemudian pelarut organik dievaporasi pada penangas air (waterbath). Residu keringnya

kemudian dilarutkan dalam kloroform. Campuran kloroform kemudian ditentukan secara

klorimetri menggunakan reagen Lieberman-Burchard.

Kolesterol serum darah secara normal berkisar dari 100 – 250 mg/100 ml. Rata-rata

jumlah kolesterol dalam serum darah adalah 200 mg/100 ml, pada usia 25 tahun yang lebih

lanjut meningkat secara perlahan dengan meningkatnya usia sampai usia 40 – 50 tahun.

Wanita umumnya menunjukkan kadar kolesterol yang lebih rendah dari pada pria sampai

dicapai saat menopause.

Penentuan kolesterol total dapat dilakukan dengan alat spektronik-20 atau alat spektro

-fotometer lain yang lebih canggih (mis: Shimadzu UV-Vis Recording Spectrophotometer

UV-160).

Bahan:

1. Serum darah

2. Campuran alkohol-aseton (1 : 1)

3. Kloroform

4. Campuran asam asetat anhidrid – asam sulfat pekat (30 : 1) dibuat sebelum dipakai.

5. Larutan stok kolesterol (2 mg kolesterol dalam 1 ml kloroform)

6. Larutan kolesterol kerja, dibuat dengan mengencerkan larutan stok kolesterol lima

kali dalam kloroform (0,4 mg/ml)

Alat-alat:

1. waterbath bergoyang

2. Sentrifuga klinik

3. Spektrofotometer

Prosedur:

Masukkan 10 ml pelarut aseton-alkohol dalam tabung sentrifuga, kemudian

tambahkan 0,2 ml serum atau darah. Celupkan tabung dalam penangas air mendidih yang

bergoyang (boiling waterbath), sampai larutan mulai mendidih. Pindahkan tabung dan

teruskan pengadukan campuran selama 5 menit. Dinginkan sampai mencapai temperatur

kamar, kemudian disentrifuga. Dekantasi supernatannya ke dalam tabung reaksi, dan

uapkan pada waterbath mendidih sampai kering. Dinginkan dan larutkan residunya dalam 2 ml kloroform. Pada saat yang sama buat larutan kolesterol standar dan blanko dalam 2 ml kloroform. Tambahkan 3 ml campuran anhidrida asam asetat dan asam sulfat pekat pada semua tabung Tempatkan semua tabung pada tempat gelap dan suhu kamar, kemudian baca absorbansinya pada panjang gelombang 686 nm [hasil dari penentuan panjang gelombang  maksimum].

Penentuan harga panjang gelombang maksimum

1.    dibuat larutan kolesterol standar dengan konsentrasi 100 mg/100 ml dengan pelarut

kloroform

2.     dipipet 0,1 ml larutan tersebut ke dalam tabung reaksi yang bersih dan kering,

3.    ditambahkan 3 ml reagen Lieberman-Buchard (campuran asam asetat anhidrid

dengan asam sulfat pekat 30:1) pada suhu dingin

4.    dikocok baik-baik menggunakan vortex-mixer, dibiarkan selama 30 menit pada

suhu kamar.

5.    diukur serapannya dari panjang gelombang 360 s/d 700 nm

6.    dibuat kurva serapan terhadap panjang gelombang, sehingga diperoleh panjang

gelombang maksimum (panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum).

Untuk menentukan konsentrasi (kadar) kolesterol total dalam darah digunakan kurva

standar kolesterol

Pembuatan kurva standar kolesterol

1.     dibuat larutan kolesterol standar dengan konsentrasi (mg/ml) berturut-turut: 0,2 ;

0,4 ; 0,6 ; 0,8 ; 1,0 ; 1,5 ; 2,0 ; 2,5.

2.    Masing-masing larutan di atas dipipet ke dalam tabung reaksi yang bersih dan

kering sebanyak 0,1 ml

3.    Pada masing-masing tabung ditambahkan 3 ml reagen Lieberman-Buchard, dikocok

baik-baik, dibiarkan selama 30 menit pada suhu kamar, diukur serapannya pada

panjang gelombang maksimum.

4.    Dibuat kurva standar serapan vs konsentrasi.

Daftar Pustaka

http://staff.uny.ac.id/sites/default/files/tmp/analisis%20lipid.pdf (11/11/2012  21:05)